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水果、蔬菜维生素 C 含量测定法
(2,6 －二氯靛酚滴定法 ) GB 6195—86
Determination of vitamin C in vegetables and fruits
(2,6-dichloro-indophenol titration method)
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1 适用范围
本标准适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型抗坏血酸的测定 ( 不含二价铁、二价
锡、一价铜、二氧化硫、亚硫酸盐或硫代硫酸盐 ), 不适用于深色样品。
2 测定原理
染料 2,6 －二氯靛酚的颜色反应表现两种特性 , 一是取决于其氧化还原状态 , 氧化态为深蓝色 , 还原态变为无色 ; 二是受其介质的酸度影响 , 在碱性溶液中呈深蓝色 , 在酸性介
质中呈浅红色。
用蓝色的碱性染料标准溶液 , 对含维生素 C 的酸性浸出液进行氧化还原滴定 , 染料被
还原为无色 , 当到达滴定终点时 , 多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色 , 由染料用量
计算样品中还原型抗坏血酸的含量。
3 仪器设备
a. 高速组织捣碎机 :8000 ～ 12000r/min 。
b. 分析天平。
c. 滴定管 :25ml 、 10ml 。
d. 容量瓶 :100ml 。
e. 锥形瓶 :100ml 、 50ml 。
f. 吸管 :10ml 、 5ml 、 2ml 、 1ml 。
g. 烧杯 :250ml 、 50ml 。
h. 漏斗。
4 试剂 ( 凡未加说明者均为分析纯 )
4.1 浸提剂
4.1.1 偏磷酸 :2% 溶液 (W/V)* ,
4.1.2 草酸 :2% 溶液 (W/V) 。
4.2 抗坏血酸标准溶液 (1mg/ml): 称取 100mg( 准确至 0.1mg) 抗坏血酸 **, 溶于浸提剂
中并稀至 100ml 。现配现用。
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* 偏磷酸不稳定 , 切勿加热。
** 一般抗坏血酸纯度为 99.5% 以上 , 可不标定。如试剂发黄 , 则弃去不用。若要检查其
纯度 , 可按附录 B 方法标定。
4.3 2,6 －二氯靛酚 (2,6 －二氯靛酚吲哚酚钠盐 ) 溶液 : 称取碳酸氢钠 52mg 溶解在 200ml
热蒸馏水中 , 然后称取 2,6 －二氯靛酚 50mg 溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至
250ml, 过滤至棕色瓶内 , 保存在冰箱中。每次使用前 , 用标准抗坏血酸标定其滴定度。即
吸取 1ml 抗坏血酸标准溶液于 50ml 锥形瓶中 , 加入 10ml 浸提剂 , 摇匀 , 用 2 ,6 －二氯靛酚溶
液滴定至溶液呈粉红色 15s 不褪色为止。同时 , 另取 10ml 浸提剂做空白试验。
滴定度按式 (1) 计算 :
C·V
滴定度 T(mg/ml) ＝ ─────………………………… (1)
V1 － V2
式中 : T—─ 每毫升 2,6 －二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数 ;
C—─ 抗坏血酸的浓度 ,mg/ml;
V—─ 吸取抗坏血酸的体积 , ml;
V1—─ 滴定抗坏血酸溶液所用 2,6 －二氯靛酚溶液的体积 ,ml;
V2—─ 滴定空白所用 2,6 －二氯靛酚溶液的体积 ,ml 。
4.4 白陶土 ( 或称高岭土 ), 对维生素 C 无吸附性。
5 测定步骤
5.1 样液制备 : 称取具有代表性样品的可食部分 100g, 放入组织捣碎机中 , 加 100ml 浸提剂 , 迅速捣成匀浆。称 10 ～ 40g 浆状样品 , 用浸提剂将样品移入 100ml 容量瓶 , 并稀释至刻度 , 摇匀过滤。若滤液有色 , 可按每克样品加 0.4g 白陶土脱色后再过滤。
5.2 滴定 : 吸取 10ml 滤液放入 50ml 锥形瓶中 , 用已标定过的 2,6 －二氯靛酚溶液滴定 ,
直至溶液呈粉红色 15s 不褪色为止。同时做空白试验。
6 结果计算
6.1 计算公式 :
维生素 C 按式 (2) 计算 :
(V － V0)·T·A
维生素 C(mg/100g) ＝ ────────-×100 …………………(2)
W
式中 : V—— 滴定样液时消耗染料溶液的体积 ,ml;
V0—— 滴定空白时消耗染料溶液的体积 ,ml;
T——2,6 －二氯靛酚染料滴定度 ,mg/ml;
A—— 稀释倍数 ;
W—— 样品重量 ,g 。
6.2 平行测定的结果 , 用算术平均值表示 , 取三位有效数字 , 含量低的保留小数点后两
位数字。
6.3 平行测定结果的相对相差 , 在维生素 C 含量大于 20mg/100g 时 , 不得超过 2%, 小于
20mg/100g 时 , 不得超过 5% 。
附 录 A
二甲苯－二氯靛酚比色法
( 补充法 )
A.1 适用范围
测定深色样品中还原型抗坏血酸。
A.2 测定原理
用定量的 2,6 －二氯靛酚染料与试样中的维生素 C 进行氧化还原反应 , 多余的染料
在酸性环境中呈红色 , 用二甲苯萃取后比色 , 在一定范围内 , 吸光度与染料浓度呈线性相关 , 收剩余染料浓度用差减法计算维生素 C 含量。
A.3 仪器设备
A.3.1 分光光度计或比色计。
A.3.2 具塞试管 :50ml 。
A.4 试剂 ( 皆为分析纯 )
A.4.1 偏磷酸 :2% 溶液 (W/V) 。
A.4.2 乙酸钠缓冲溶液 (pH4.0):500ml50%(W/V) 的乙酸钠溶液与 500ml 冰乙酸混合。
A.4.3 2,6 －二氯靛酚溶液 : 参照 4.3 条。
A.4.4 二甲苯。
A.5 测定步骤
A.5.1 标准曲线的绘制 : 用 6 只 50ml 具塞试管加入 5ml2% 偏磷酸和 5mlpH4.0 的乙酸钠缓
冲液 , 然后依次加入 0.0 ,0.1,0.3,0.6,0.9,1.2 及 1.5ml 2,6 －二氯靛酚溶液 , 用
力摇动 5s, 再向各试管中加入 10ml 二甲苯 , 再激烈摇动 20s, 静置分层后与试样管同时比色
( 无染料的试液作空白 ), 以吸光度为纵坐标 ,2,6 －二氯靛酚的毫升数为横坐标绘制标
准曲线。
A.5.2 吸取 5ml2% 偏磷酸样品浸出液 ( 参照 5.1 条 ) 于 50ml 具塞试管中 , 加 5mlpH4.0 的
乙酸钠缓冲液和 2ml 染料溶液 , 激烈摇动 5s, 立即加入 10ml 二甲苯 , 再激烈摇动 20s, 待静置分层后 , 从二甲苯层中小心吸取一份 , 放入 1cm 比色杯中于 500nm 波长下进行比色。记
录吸光度 A, 在标准曲线上查出二甲苯层中 2,6 －二氯靛酚的毫升数。整个操作应在 30
min 内完成。
A.6 计算公式
(2 － V)·T·A
维生素 C(mg/100g) ＝ ──────×100
W
式中 : 2—─ 所用 2,6 －二氯靛酚染料的体积 ,ml ;
V—─ 查得 2,6 －二氯靛酚溶液的体积 ,ml;
A—─ 稀释倍数 ;
T—─ 染料滴定度 ,mg/ml;
W—─ 样品重量 ,g 。
附 录 B
抗坏血酸纯度检验法
( 补充件 )
B.1 称取 100mg( 准确至 0.1mg) 抗坏血酸待测样品 , 用 2% 偏磷酸或 2% 草酸溶液溶解稀
释至 100ml 。
B.2 吸取抗坏血酸溶液 1ml 于盛 10ml 2% 偏磷酸或 2% 草酸溶液的锥形瓶中 , 加入 6% 碘
化钾溶液 0.5ml 和 1% 淀粉溶液五滴 , 摇匀。用 1.67×10** － 4M 碘酸钾标准溶液滴定 ,
终点为极淡蓝色。
B.3 计算公式
B.3.1 抗坏血酸浓度按式 (B1) 计算 :
V1×0.088
抗坏血酸浓度＝ ────── ……………………………… (B1)
V2
式中 : V1—─ 滴定时消耗 1.67×10** － 4 M 碘酸钾标准溶液的体积 ,ml;
V2—─ 所取抗坏血酸溶液的体积 ,ml;
0.088—─1 ml 1.67×10** － 4 M 碘酸钾溶液相当于抗坏血酸的重量 ,mg;
B.3.2 抗坏血酸纯度 (%) 按式 (B2) 计算 :
C·V
抗坏血酸纯度 (%) ＝ ───×100 ……………………………(B2)
W
式中 : C—─ 所标定抗坏血酸的浓度 ,mg/ml;
V—─ 抗坏血酸溶液总体积 ,ml;
W—─ 抗坏血酸重量 ,mg 。
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附加说明 :
本标准由中华人民共和国农牧渔业部提出。
本标准由江苏省农科院综合实验室负责起草。
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国家标准局 1986-01-18 发布 1986-08-01 实施 |
